Общее количество белка в пробе

Общее количество белка в пробе

При разбавлении белка необходимо к каждой пробе добавить 10% от объема растворителя 0,1% меркаптоэтанола. Общее количество белка в пробе определяли по методу Лоури. Хроматографию проводили на хроматографической системе с УФ-детектором, согласно методическим рекомендациям. Условия хроматографии: детектор УФ-220 нм; колонка С-18 фирмы «Beckman» (США); градиент концентраций из двух фаз от 50 до 100%; верхняя фаза постоянно увеличивается, доходя до 100%; скорость протока 0,7; время разгонки 1 ч. Перед разгонкой проб пропускали в течение часа чистый градиент в концентрации 50—100% по верхнему буферу и добивались ровной базовой линии.

Перед разгонкой проб пропускали в течение часа чистый градиент в концентрации 50—100% по верхнему буферу и добивались ровной базовой линии. Состав фаз: верхняя фаза — 100 мл воды, 100 мл 0,75 N NaCl04, 1 мл концентрированной ортофосфорной кислоты и 800 мл ацетонитрила; нижняя фаза — 100 мл ацетонитрила, 100 мл 0,75 N NaC104, 1 мл концентрированной ортофосфорной кислоты и 800 мл воды. Все растворы готовят на деионизированной воде. Полученные хроматограммы подвергали компьютерной обработке, где рассчитывался процент площади каждого пика к общей площади всех пиков, принятой за 100%. Поскольку количество белка, введенного в колонку, было одинаковым во всех образцах, то это позволило оценить изменения количества белков той или иной фракции в процентах.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Загрузка ... Загрузка ...

Оставить комментарий

Почта (не публикуется) Обязательные поля помечены *

Вы можете использовать эти HTML теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите человечка с поднятой рукой: