Анализ фракций ядерных гистонов мозга

Анализ фракций ядерных гистонов мозга

Затем все пробирки доливали до равного объема той же сахарозой и хорошо перемешивали. Содержимое каждой пробирки переносили для центрифугирования в большие пробирки (35 мл), в которых уже были наслоены 3 градиента сахарозы: 1) 5 мл 2,0 М сахарозы на ТКМ; 2) 2 мл 1,9 М сахарозы с 0,1% тритоном Х-100 на ТКМ; 3) 0,5 мл 1,65 М сахарозы на ТКМ. Пробирки центрифугировали в течение 60 мин при 100 000 g (VAK—602). Осадок ядер на дне пробирки ресуспензировали в 1,5—2 мл 0,25 М сахарозы на ТКМ и центрифугировали 10 мин при 4000 об/мин. Для удаления глобулиновых белков осадок дважды промывали 0,14 М NaCI на воде. Для удаления глобулиновых белков осадок дважды промывали 0,14 М NaCI на воде. Из отмытых ядер экстрагировали гистоны 0,25 N НСI, оставляя пробирки на ночь в холодильнике. Утром их центрифугировали при 14 000 об/мин, супернатант отбирали, осадок дважды промывали 0,25 N НСI и центрифугировали.

К экстракту гистонов прибавляли 10 объемов холодного ацетона, перемешивали и ставили на 1 час в морозилку. Затем гистоны осаждали центрифугированием и дважды промывали их ацетоном. После высушивания осадка образуются рыхлые кристаллы.

Вещество хранят в запаянных под вакуумом пробирках при температуре минус 20 *С. Анализ фракций ядерных гистонов мозга осуществляли с помощью ВЭЖХ. Перед исследованием фракционного состава гистонов их растворяли в деионизированной воде так, чтобы в 100 мкл содержалось 350 мкг белка.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Загрузка ... Загрузка ...

Оставить комментарий

Почта (не публикуется) Обязательные поля помечены *

Вы можете использовать эти HTML теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите человечка с поднятой рукой: